O le vaila'au fa'amama anufe N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) ua lipotia mai e taofia ai le AChE (acetylcholinesterase) ma e ono iai ni meatotino e mafua ai le kanesa ona o le tele o le vascularization. I totonu o lenei pepa, matou te faʻaalia ai o le DEET e faʻaosofia faapitoa ai sela endothelial e faʻalauiloa ai le angiogenesis, ma faʻateleina ai le tuputupu aʻe o le tumo. E faʻagaoioia e le DEET faiga o sela e oʻo atu ai i le angiogenesis, e aofia ai le faʻateleina, femalagaiga, ma le pipii. E fesoʻotaʻi lenei mea ma le faʻateleina o le gaosiga o le NO ma le faʻaalia o le VEGF i sela endothelial. O le faʻafilemuina o le M3 poʻo le faʻaaogaina o vailaʻau faʻapitoa M3 inhibitors na faʻaumatia ai nei aafiaga uma, ma faʻailoa mai ai o le angiogenesis e mafua mai i le DEET e maaleale i le M3. O faʻataʻitaʻiga e aofia ai le calcium signaling i sela endothelial ma HEK e sili atu le faʻaalia o M3 receptors, faʻapea foʻi ma suʻesuʻega o le fusifusia ma le faʻapipiʻiina, e faʻaalia ai o le DEET e galue o se allosteric modulator o M3 receptors. E le gata i lea, e taofia e le DEET le AChE, ma faʻateleina ai le bioavailability o le acetylcholine ma lona fusifusia i M3 receptors, ma faʻaleleia atili ai aafiaga proangiogenic e ala i le allosteric regulation.
Sa vavae'eseina EC muamua mai le aorta o isumu Suisi. O le metotia o le aveeseina sa fetu'una'i mai le Kobayashi protocol 26. Sa totoina Murine EC i le EBM-2 medium fa'aopoopo i ai le 5% heat-inactivated FBS se'ia o'o i le fa'asologa lona fa.
O le aafiaga o ni fa'aputuga se lua o le DEET i le fa'ateleina o le HUVEC, U87MG, po'o le BF16F10 na su'esu'eina e fa'aaoga ai le CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes, C7026). I se aotelega, e 5.103 sela i le vaieli na totoina i totonu o se ipu e 96-vaieli, tu'u e fa'apipi'i i le po atoa, ona togafitia lea i le DEET mo le 24 itula. A uma ona aveese le mea e fa'atupu ai le tuputupu a'e, fa'aopoopo le vaila'au e fusifusia ai le vali i vaieli ta'itasi o le microplate ma fa'asusu sela i le 37 °C mo le 30 minute. Na fuafuaina le maualuga o le fluorescence e fa'aaoga ai le Mithras LB940 multimode microplate reader (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Siamani) ua fa'apipi'iina i le 485 nm excitation filters ma le 530 nm emission filters.
Sa totoina HUVEC i totonu o ipu e 96-vai i le mafiafia o le 104 sela i le vai. Sa togafitia sela i le DEET mo le 24 itula. Sa iloiloina le ola o sela e faʻaaoga ai le colorimetric MTT assay (Sigma-Aldrich, M5655). Sa maua fua o le mafiafia opitika i luga o le multimode microplate reader (Mithras LB940) i le wavelength o le 570 nm.
Sa suʻesuʻeina aafiaga o le DEET e faʻaaoga ai suʻega in vitro angiogenesis. O togafitiga i le 10-8 M poʻo le 10-5 M DEET na faʻateleina ai le fausiaina o le umi o le capillary i HUVECs (Ata 1a, b, paʻepaʻe). Pe a faʻatusatusa i le vaega faʻatonutonu, o togafitiga i le maualuga o le DEET mai le 10-14 i le 10-5 M na faʻaalia ai o le umi o le capillary na oʻo atu i se tulaga maualuga i le 10-8 M DEET (Ata Faʻaopoopo S2). E leai se eseesega taua na maua i le aafiaga proangiogenic in vitro o HUVECs na togafitia i le DEET i le vaega o le maualuga o le 10-8 M ma le 10-5 M.
Ina ia iloa le aafiaga o le DEET i le neovascularization, na matou faia ai ni suʻesuʻega in vivo neovascularization. Ina ua mavae aso e 14, o isumu na tuiina i sela endothelial na muaʻi totoina i le 10-8 M poʻo le 10-5 M DEET na faaalia ai se faʻaopoopoga tele i le aofaʻi o le hemoglobin (Ata 1c, paʻepaʻe).
E le gata i lea, o le neovascularization na mafua mai i le DEET na suʻesuʻeina i isumu e iai le xenograft U87MG na tuiina i aso uma (ip) i le DEET i se fua e iloa e faʻaosofia ai le plasma concentrations o le 10-5 M, o se mea masani i tagata na aʻafia. i le 23. O tumo e mafai ona iloa (e pei o tumo >100 mm3) na matauina i le 14 aso talu ona tuiina sela U87MG i isumu. I le aso 28, o le tuputupu aʻe o le tumo na matua faʻateleina i isumu na togafitia i le DEET pe a faʻatusatusa i isumu faʻatonutonu (Ata 1d, sikuea). E le gata i lea, o le valiina o tumo e le CD31 na faʻaalia ai o le DEET na faʻateleina ai le capillary area ae le o le microvessel density. (Ata 1e–g).
Ina ia iloa le matafaioi a muscarinic receptors i le faʻateleina o le DETA, na faʻaaogaina ai le 10-8 M poʻo le 10-5 M DETA i le i ai o le pFHHSiD (10-7 M, o se M3 receptor antagonist filifilia). Togafitiga o le HUVEC. Na poloka atoa e le pFHHSiD ia meatotino faʻateleina o le DETA i tulaga uma (Laulau 1).
I lalo o nei tulaga, na matou suʻesuʻeina foʻi pe o le a faʻateleina e le DEET le umi o le capillary i totonu o sela HUVEC. I se tulaga tutusa, o le pFHHSiD na taofia ai le umi o le capillary e mafua mai i le DEET (Ata 1a, b, pa efuefu). E le gata i lea, na faia ni faʻataʻitaʻiga faapena i le M3 siRNA. E ui lava e leʻi aoga le siRNA pulea i le faʻalauiloaina o le fausiaina o capillary, o le faʻafilemuina o le M3 muscarinic receptor na faʻaumatia ai le mafai o le DEET ona faʻateleina le umi o le capillary (Ata 1a, b, pa uliuli).
E le gata i lea, o le 10-8 M po'o le 10-5 M DEET-induced vascularization in vitro ma le neovascularization in vivo na matua poloka lava e le pFHHSiD (Ata 1c, d, li'o). O nei taunuuga e fa'ailoa mai ai o le DEET e fa'alauiloa le angiogenesis e ala i se auala e ma'ale'ale i M3 receptor antagonists po'o le M3 siRNA.
O le AChE o le sini fa'amolekula o le DEET. O vaila'au e pei o le donepezil, lea e fai ma mea e taofia ai le AChE, e mafai ona fa'aosofia ai le EC angiogenesis i totonu o le vitro ma i totonu o fa'ata'ita'iga o le ischemia o le hindlimb o isumu14. Na matou fa'ata'ita'iina le a'afiaga o le lua o le DEET i le gaioiga o le enzyme AChE i le HUVEC. O le maualalo (10-8 M) ma le maualuga (10-5 M) o le DEET na fa'aitiitia ai le gaioiga o le endothelial AChE pe a fa'atusatusa i tulaga fa'atonutonu (Ata 2).
O le tele o le DEET (10-8 M ma le 10-5 M) na faʻaitiitia ai le gaioiga o le acetylcholinesterase i luga o le HUVEC. O le BW284c51 (10-5 M) na faʻaaogaina o se faʻatonutonu mo mea e taofia ai le acetylcholinesterase. O taunuʻuga o loʻo faʻaalia o se pasene o le gaioiga o le AChE i luga o le HUVEC na togafitia i le tele o le DEET pe a faʻatusatusa i sela na togafitia i le taʻavale. O tau o loʻo faʻaalia o le averesi ± SEM o faʻataʻitaʻiga tutoʻatasi e ono. *p < 0.05 pe a faʻatusatusa i le faʻatonutonu (suʻega faʻatusatusaga tele a Kruskal-Wallis ma Dunn).
O le Nitric oxide (NO) e aʻafia i le faiga o le angiogenic 33, o le mea lea, na suʻesuʻeina ai le gaosiga o le NO i HUVECs na faʻaosofia e le DEET. O le gaosiga o le endothelial NO na togafitia i le DEET na faʻateleina pe a faʻatusatusa i sela pulea, ae na oʻo atu i le taua i le fua o le 10-8 M (Ata 3c). Ina ia iloa ai suiga o le molecular o loʻo pulea ai le gaosiga o le NO na mafua mai i le DEET, na suʻesuʻeina le faʻaalia ma le faʻagaoioiga o le eNOS e ala i le Western blotting. E ui lava e leʻi suia e le togafitiga DEET le faʻaalia o le eNOS, ae na faʻateleina tele ai le phosphorylation o le eNOS i lona nofoaga faʻagaoioiga (Ser-1177) aʻo faʻaitiitia ai lona nofoaga faʻalavelave (Thr-495) pe a faʻatusatusa i sela e leʻi togafitia i le phosphorylation o le eNOS (Ata 3d). E le gata i lea, o le fua faatatau o le phosphorylated eNOS i le nofoaga faʻagaoioiga ma le nofoaga faʻalavelave na fuafuaina ina ua maeʻa ona faʻatulagaina le aofaʻi o le phosphorylated eNOS i le aofaʻi atoa o le enzyme. O lenei fua faatatau na faʻateleina tele i HUVECs na togafitia i le maualuga taʻitasi o le DEET pe a faʻatusatusa i sela e leʻi togafitia (Ata 3d).
I le iuga, o le faʻaalia o le VEGF, o se tasi o mea taua e mafua ai le faʻatupuina o le angiogenic, na suʻesuʻeina e ala i le Western blotting. O le DEET na faʻateleina tele ai le faʻaalia o le VEGF, ae o le pFHHSiD na poloka atoa ai lenei faʻaalia.
Talu ai o aafiaga o le DEET e maaleale i le poloka fa'afoma'i ma le fa'aitiitia o le M3 receptors, na matou fa'ata'ita'iina ai le manatu e fa'apea o le DEET e ono fa'aleleia atili ai le fa'ailoilo o le calcium. O le mea e ofo ai, na le mafai e le DEET ona fa'ateleina le cytoplasmic calcium i le HUVEC (e le'i fa'aalia mai fa'amaumauga) ma le HEK/M3 (Ata 4a, b) mo fa'aputuga uma e lua na fa'aaogaina.
Taimi na lafoina ai: Tesema-30-2024