I lenei suʻesuʻega, o aafiaga faʻaosofia o le togafitiga tuʻufaʻatasi ofa'atonutonu tuputupu a'e o la'au(2,4-D ma le kinetin) ma nanoparticles o le iron oxide (Fe₃O₄-NPs) i luga o le in vitro morphogenesis ma le gaosiga o metabolite lona lua i le *Hypericum perforatum* L. Sa suʻesuʻeina. O le togafitiga faʻaleleia atili [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] na faʻaleleia atili ai le tuputupu aʻe o le laʻau: o le maualuga o le laʻau na faʻateleina i le 59.6%, le umi o aʻa i le 114.0%, le numera o fuga i le 180.0%, ma le mamafa fou o le callus i le 198.3% pe a faʻatusatusa i le vaega faʻatonutonu. O lenei togafitiga tuʻufaʻatasi na faʻaleleia atili ai foʻi le lelei o le toe faʻafouina (50.85%) ma faʻateleina ai le aofaʻi o le hypericin i le 66.6%. O le au'ili'iliga GC-MS na fa'aalia ai le maualuga o le hyperoside, β-patholene, ma le cetyl alcohol, e 93.36% o le aofa'i atoa o le tumutumuga, a'o le aofa'i atoa o phenolics ma flavonoids na fa'ateleina e o'o atu i le 80.1%. O nei taunu'uga e fa'ailoa mai ai o lo'o fa'atinoina e le plant growth regulators (PGRs) ma le Fe₃O₄ nanoparticles (Fe₃O₄-NPs) se aafiaga fa'atasi e ala i le fa'aosofiaina o le organogenesis ma le fa'aputuina o vaila'au bioactive, lea e fa'atusalia ai se fuafuaga folafolaina mo le fa'aleleia atili o tekinolosi fa'aola o la'au fa'afoma'i.
O le St. John's wort (Hypericum perforatum L.), e ta'ua fo'i o le St. John's wort, o se la'au e ola i le tele o tausaga o le aiga Hypericaceae e iai lona taua tau tamaoaiga.[1] O ona vaega bioactive e mafai ona aofia ai tannins masani, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin ma pseudohyperin), flavonoids, phenolic acids, ma suāuu taua.[2,3,4] E mafai ona fa'ateleina le St. John's wort i auala masani; peita'i, o le fa'asologa o taimi o auala masani, le maualalo o le tuputupu a'e o fatu, ma le faigofie ona a'afia i fa'ama'i e fa'atapula'aina ai lona gafatia mo le totoina tele ma le fa'aauau pea ona fa'atupuina o metabolites lona lua.[1,5,6]
O le mea lea, o le totoina o aano i totonu o le vitro ua manatu o se metotia aoga mo le vave faʻateleina o laʻau, faʻasaoina o punaoa o le germplasm, ma le faʻateleina o le fua o vailaʻau faʻafomaʻi [7, 8]. O mea e faʻatonutonu ai le tuputupu aʻe o laʻau (PGR) e taua tele i le faʻatonutonuina o le morphogenesis ma e manaʻomia mo le totoina o le callus ma meaola atoa i totonu o le vitro. O le faʻaleleia atili o latou faʻaputuga ma tuʻufaʻatasiga e taua tele mo le faʻamaeʻaina manuia o nei faiga faʻaleleia [9]. O le mea lea, o le malamalama i le faʻatulagaina talafeagai ma le faʻaputuga o mea e faʻatonutonuina e taua mo le faʻaleleia atili o le tuputupu aʻe ma le gafatia toe faʻafouina o le wort a St. John (H. perforatum) [10].
O nanoparticles o le u'amea 'okesi (Fe₃O₄) o se vasega o nanoparticles ua uma ona atia'e pe o lo'o atia'e mo le totoina o a'ano o manu. O le Fe₃O₄ e iai ona uiga fa'amaneta taua, lelei le fetaui lelei ma le siosiomaga, ma le gafatia e fa'alauiloa ai le tuputupu a'e o la'au ma fa'aitiitia ai le atuatuvale mai le siosiomaga, o lea ua tosina mai ai le tele o le gauai i mamanu o totoina o a'ano o manu. O fa'aoga e ono mafai ona fa'aaogaina o nei nanoparticles e aofia ai le fa'aleleia atili o le totoina i totonu o le vitro e fa'alauiloa ai le vaevaeina o sela, fa'aleleia atili ai le fa'aaogaina o mea'ai, ma fa'agaoioia ai enzymes antioxidant [11].
E ui lava ina ua faaalia e nanoparticles ni aafiaga lelei i le tuputupu aʻe o laʻau, ae o suʻesuʻega i le faʻaaogaina faʻatasi o nanoparticles Fe₃O₄ ma faʻaleleia atili o le tuputupu aʻe o laʻau i le *H. perforatum* e seasea lava. Ina ia faʻatumuina lenei va o le malamalama, na iloiloina ai e lenei suʻesuʻega aafiaga o latou aafiaga faʻatasi i le in vitro morphogenesis ma le gaosiga o metabolite lona lua e maua ai ni malamalamaga fou mo le faʻaleleia atili o uiga o laʻau faʻafomaʻi. O le mea lea, o lenei suʻesuʻega e lua ona sini: (1) faʻaleleia atili le faʻaputuina o faʻatonutonu tuputupu aʻe o laʻau e faʻalauiloa lelei ai le fausiaina o callus, toe faʻafouina o le au, ma le aʻa i totonu o le vitro; ma le (2) iloilo aafiaga o nanoparticles Fe₃O₄ i tulaga tuputupu aʻe i totonu o le vitro. O fuafuaga i le lumanaʻi e aofia ai le iloiloina o le fua faatatau o le ola o laʻau toe faʻafouina i le taimi o le faʻafetaui (in vitro). E faʻamoemoeina o le a faʻaleleia atili e taunuʻuga o lenei suʻesuʻega le lelei o le micropropagation o le *H. perforatum*, ma fesoasoani ai i le faʻaaogaina gafataulimaina ma faʻaoga faʻatekinolosi faʻatekonolosi o lenei laʻau faʻafomaʻi taua.
I lenei suʻesuʻega, na matou maua ai ni faʻaputuga lau mai laʻau St. John's wort e totoina i le fanua (laʻau tina). O nei faʻaputuga na faʻaaogaina e faʻaleleia atili ai tulaga o le totoina i totonu o le vitro. Aʻo leʻi totoina, sa fufuluina lelei lau i lalo o le vai mama mo ni nai minute. Ona faʻamamāina lea o luga o le faʻaputuga e ala i le faʻasusuina i le 70% ethanol mo le 30 sekone, ona sosoo ai lea ma le faʻasusuina i totonu o se vailaʻau 1.5% sodium hypochlorite (NaOCl) o loʻo i ai ni nai mataua o le Tween 20 mo le 10 minute. Mulimuli ane, sa fufuluina faatolu faʻaputuga i le vai mama aʻo leʻi faʻaliliuina i le isi auala totoina.
I le isi fa vaiaso, na fuaina ai tulaga o le toe faʻafouina o le tuputupu aʻe o le laʻau, e aofia ai le fua faatatau o le toe faʻafouina, le aofaʻi o laʻau i le faʻatoʻaga taʻitasi, ma le umi o laʻau. A oʻo atu laʻau ua toe faʻafouina i le umi e le itiiti ifo i le 2 cm, ona faʻaliliuina lea i se vailaʻau e aofia ai le afa-malosi o le MS medium, 0.5 mg/L indolebutyric acid (IBA), ma le 0.3% guar gum. Na faʻaauau pea le totoina o laʻau mo le tolu vaiaso, ma o le taimi lea na fuaina ai le fua faatatau o le tuputupu aʻe, le aofaʻi o aʻa, ma le umi o aʻa. O togafitiga taʻitasi na toe faia faatolu, ma le 10 faʻatoʻaga i le faʻataʻitaʻiga taʻitasi, ma maua ai le tusa ma le 30 faʻatoʻaga i le togafitiga taʻitasi.
Sa fuaina le maualuga o le la'au i senitimita (cm) e fa'aaoga ai se fua, mai le pito i lalo o le la'au e o'o atu i le pito i luga o le lau e aupito maualuga. Sa fuaina le umi o le a'a i milimita (mm) i le taimi lava e uma ai ona aveese ma le fa'aeteete ia la'au ma aveese le mea e ola ai. Sa faitauina sa'o le aofa'i o pupuni i le la'au ta'itasi. O le aofa'i o togitogi uliuli i lau, e ta'ua o nodules, sa fuaina i le va'ai. O nei nodules uliuli e talitonuina o ni glands o lo'o i ai le hypericin, po'o ni togitogi oxidative, ma e fa'aaogaina o se fa'ailoga fa'aletino o le tali atu o le la'au i togafitiga. A uma ona aveese uma le mea e ola ai, sa fuaina le mamafa fou o la'au e fa'aaoga ai se fua fa'aeletoronika e sa'o lelei i milligrams (mg).
O le auala e fuafua ai le saoasaoa o le fausiaina o le callus e faapenei: a maeʻa ona totoina ni explants i totonu o se medium o loʻo i ai ni mea e faʻatonutonu ai le tuputupu aʻe (kinases, 2,4-D, ma le Fe3O4) mo le fa vaiaso, ona faitauina lea o le aofaʻi o explants e mafai ona fausia ai le callus. O le fua faʻatatau mo le fuafuaina o le saoasaoa o le fausiaina o le callus e faapenei:
Sa toe faia faatolu togafitiga taitasi, ma ia le itiiti ifo i le 10 explants na siakiina i togafitiga taitasi.
O le fua faatatau o le toe faʻafouina o le laau e atagia ai le vaega o le aano o le callus e faʻamaeʻa lelei le faagasologa o le tuputupu aʻe o le fuga pe a uma le laasaga o le fausiaina o le callus. O lenei faʻailoga e faʻaalia ai le mafai e le aano o le callus ona liua i ni aano ua eseese ma tuputupu aʻe i ni totoga fou o laʻau.
O le fua fa'atatau o le a'a o le fua fa'atatau lea o le aofa'i o lālā e mafai ona a'a i le aofa'i atoa o lālā. O lenei fa'ailoga e atagia ai le manuia o le la'asaga o le a'a, lea e taua tele i le fa'ateleina o la'au ma le fa'ateleina o la'au, aua o le a'a lelei e fesoasoani i la'au e ola lelei i tulaga o le tuputupu a'e.
Sa fa'a'ese'esea vaega o le Hypericin i le 90% methanol. E limasefulu mg o la'au mago sa fa'aopoopo i le 1 ml o le methanol ma fa'a'ese'ese mo le 20 minute i le 30 kHz i totonu o se masini fa'amamā ultrasonic (fa'ata'ita'iga A5120-3YJ) i le vevela o le potu i le pogisa. A mae'a le sonication, sa fa'ase'e le fa'ata'ita'iga i le 6000 rpm mo le 15 minute. Sa aoina le supernatant, ma sa fuaina le absorbance o le hypericin i le 592 nm e fa'aaoga ai le Plus-3000 S spectrophotometer e tusa ai ma le metotia na fa'amatalaina e Conceiçao et al. [14].
O le tele o togafitiga i mea e fa'atonutonu ai le tuputupu a'e o la'au (PGR) ma nanoparticles o le iron oxide (Fe₃O₄-NPs) e le'i fa'aosofia ai le fausiaina o ni nodule uliuli i lau o la'au ua toe fa'afouina. E leai ni nodule na va'aia i so'o se togafitiga ma le 0.5 po'o le 1 mg/L 2,4-D, 0.5 po'o le 1 mg/L kinetin, po'o le 1, 2, po'o le 4 mg/L nanoparticles o le iron oxide. O ni nai tu'ufa'atasiga na fa'aalia ai se fa'aopoopoga la'ititi i le atina'eina o nodule (ae le o se mea taua fa'amau'upu) i le maualuga o le kinetin ma/po'o nanoparticles o le iron oxide, e pei o le tu'ufa'atasiga o le 2,4-D (0.5–2 mg/L) ma le kinetin (1–1.5 mg/L) ma nanoparticles o le iron oxide (2–4 mg/L). O nei taunu'uga o lo'o fa'aalia i le Ata 2. O nodules uliuli e fa'atusalia ai glands e tele ai le hypericin, e tutupu fa'alenatura ma aoga. I lenei suʻesuʻega, o nodules uliuli sa fesoʻotaʻi tele ma le enaena o aano, o loʻo faʻaalia ai se siosiomaga lelei mo le faʻaputuina o hypericin. O togafitiga i le 2,4-D, kinetin, ma Fe₃O₄ nanoparticles na faʻalauteleina ai le tuputupu aʻe o le callus, faʻaitiitia ai le enaena, ma faʻateleina ai le aofaʻi o chlorophyll, ma faʻaalia ai le faʻaleleia atili o le galuega metabolic ma le ono faʻaitiitia o le faʻaleagaina o le oxidative [37]. O lenei suʻesuʻega na iloiloina ai aafiaga o le kinetin faʻatasi ai ma le 2,4-D ma Fe₃O₄ nanoparticles i le tuputupu aʻe ma le atinaʻeina o le St. John's wort callus (Ata 3a–g). O suʻesuʻega na muamua atu na faʻaalia ai o le Fe₃O₄ nanoparticles e iai gaioiga antifungal ma antimicrobial [38, 39] ma, pe a faʻaaogaina faʻatasi ma mea e faʻatonutonu ai le tuputupu aʻe o laʻau, e mafai ona faʻaosofia ai auala puipuia o laʻau ma faʻaitiitia ai faʻailoga o le atuatuvale o le sela [18]. E ui o le biosynthesis o metabolites lona lua e faʻatonutonuina faʻasolopito, o latou fua moni e matua faʻalagolago lava i tulaga o le siosiomaga. O suiga o le metabolism ma morphology e mafai ona aʻafia ai le maualuga o le metabolite lona lua e ala i le faʻatonutonuina o le faʻaalia o genes faʻapitoa o laʻau ma le tali atu i mea tau siosiomaga. E le gata i lea, e mafai e mea fa'aosofia ona fa'aosofia le fa'agaoioiga o ni kene fou, lea e fa'aosofia ai le gaioiga o le enzymatic, ma iu ai ina fa'agaoioia le tele o auala biosynthetic ma o'o atu ai i le fausiaina o metabolites lona lua. E le gata i lea, o se isi su'esu'ega na fa'aalia ai o le fa'aitiitia o le paolo e fa'ateleina ai le susulu o le la, ma fa'ateleina ai le vevela o le ao i le nofoaga masani o le *Hypericum perforatum*, lea e fesoasoani fo'i i le fa'ateleina o le fua o le hypericin. E fa'avae i luga o nei fa'amaumauga, na su'esu'eina ai e lenei su'esu'ega le matafaioi o nanoparticles u'amea o ni mea fa'aosofia i le totoina o a'ano. O taunu'uga na fa'aalia ai e mafai e nei nanoparticles ona fa'agaoioia ni kene e a'afia i le biosynthesis o le hesperidin e ala i le fa'aosofia o le enzymatic, e o'o atu ai i le fa'ateleina o le fa'aputuina o lenei vaila'au (Ata 2). O le mea lea, pe a fa'atusatusa i la'au o lo'o ola i lalo o tulaga masani, e mafai ona finauina o le gaosiga o ia vaila'au i totonu o le tino ola e mafai fo'i ona fa'aleleia pe a fa'apipi'i le atuatuvale feololo ma le fa'agaoioiga o kene e a'afia i le biosynthesis o metabolites lona lua. O togafitiga tu'ufa'atasi e masani ona i ai se aafiaga lelei i le fua faatatau o le toe fa'afouina, ae i nisi tulaga, e fa'avaivaia lenei aafiaga. E tāua tele, o togafitiga i le 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L kinase, ma ni fa'aputuga eseese e mafai ona tuto'atasi ma fa'ateleina tele ai le fua fa'aolaola e 50.85% pe a fa'atusatusa i le vaega fa'atonutonu (Ata 4c). O nei taunu'uga e fa'ailoa mai ai o tu'ufa'atasiga fa'apitoa o nanohormones e mafai ona galulue fa'atasi e fa'alauiloa ai le tuputupu a'e o la'au ma le gaosiga o metabolite, lea e matua taua tele mo le totoina o a'ano o la'au fa'afoma'i. Na fa'aalia e Palmer ma Keller [50] o togafitiga 2,4-D e mafai ona tuto'atasi ona fa'aosofia ai le fausiaina o callus i le St. perforatum, a'o fa'aopoopoina le kinase e fa'aleleia atili ai le fausiaina ma le toe fa'afouina o callus. O lenei aafiaga na mafua mai i le fa'aleleia atili o le paleni o hormones ma le fa'aosofiaina o le vaevaeina o sela. Na maua e Bal et al. [51] o togafitiga Fe₃O₄-NP e mafai ona tuto'atasi ona fa'aleleia atili ai le galuega a enzymes antioxidant, ma fa'alauiloa ai le tuputupu a'e o a'a i le St. perforatum. O ala fa'ato'aga o lo'o i ai ni nanoparticles Fe₃O₄ i le maualuga o le 0.5 mg/L, 1 mg/L, ma le 1.5 mg/L na fa'aleleia atili ai le saoasaoa o le toe fa'afouina o la'au flax [52]. O le fa'aaogaina o le kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, ma le Fe₃O₄ nanoparticles na fa'aleleia atili ai le saoasaoa o le fausiaina o le callus ma a'a, peita'i, e mana'omia ona mafaufau i aafiaga e ono tula'i mai i le fa'aaogaina o nei hormones mo le toe fa'afouina i totonu o le vitro. Mo se fa'ata'ita'iga, o le fa'aaogaina umi po'o le maualuga o le fa'aogaina o le 2,4-dichlorobenzothiazolinone po'o le kinetin e ono i'u ai i le suiga o le somatic clonal, oxidative stress, abnormal callus morphology, po'o le vitrification. O le mea lea, o le maualuga o le fua faatatau o le toe fa'afouina e le o lona uiga e vavalo ai le mautu o le kenera. O la'au uma ua toe fa'afouina e tatau ona iloiloina e fa'aaoga ai fa'ailoga molecular (e pei o le RAPD, ISSR, AFLP) po'o le su'esu'ega cytogenetic e iloa ai lo latou homogeneity ma le tutusa ma la'au in vivo [53,54,55].
O lenei suʻesuʻega ua faʻaalia ai mo le taimi muamua o le faʻaaogaina faʻatasi o mea e faʻatonutonu ai le tuputupu aʻe o laʻau (2,4-D ma le kinetin) faʻatasi ai ma nanoparticles Fe₃O₄ e mafai ona faʻaleleia atili ai le morphogenesis ma le faʻaputuina o metabolites taua bioactive (e aofia ai le hypericin ma le hyperoside) i le *Hypericum perforatum*. O le faiga togafitiga faʻaleleia atili (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) e le gata ina faʻateleina ai le fausiaina o callus, organogenesis, ma le gaosiga o metabolite lona lua ae faʻaalia ai foʻi se aafiaga faʻaosofia māmā, e ono faʻaleleia atili ai le onosaʻi o le laʻau i le atuatuvale ma le taua faʻafomaʻi. O le tuʻufaʻatasia o le nanotechnology ma le totoina o aano o laʻau e maua ai se faʻavae gafataulimaina ma lelei mo le gaosiga tele o vailaʻau faʻafomaʻi i totonu o le vitro. O nei taunuuga e saunia ai le ala mo faʻaoga faʻapisinisi ma suʻesuʻega i le lumanaʻi i faiga faʻamolekula, faʻaleleia atili o le fua ma le saʻo o kenera, ma faʻafesoʻotaʻi ai suʻesuʻega faʻavae i luga o laʻau faʻafomaʻi ma le biotechnology aoga.
Taimi na lafoina ai: Tesema-12-2025