O le pine nematode o se endoparasite femalagaa'i fa'a-karantina ua iloa e mafua ai ni fa'aletonu tetele tau tamaoaiga i totonu o si'osi'omaga o vaomatua paina. O lenei su'esu'ega o lo'o iloiloina ai le gaioiga fa'a-nematicidal o indoles halogenated e fa'asaga i pine nematodes ma a latou faiga o gaioiga. O gaioiga fa'a-nematicidal o le 5-iodoindole ma le avermectin (pulega lelei) e fa'asaga i pine nematodes e tutusa ma maualuga i le maualalo o le malosi (10 μg/mL). O le 5-iodoindole na fa'aitiitia ai le fanautama, gaioiga toe fanau, oti o pepe ma anufe, ma amioga fa'a-locomotor. O fegalegaleaiga fa'a-molecular o ligands ma invertebrate-specific glutamate-gated chloride channel receptors e lagolagoina ai le manatu o le 5-iodoindole, e pei o le avermectin, e fusifusia mau i le nofoaga galue o le receptor. O le 5-Iodoindole na mafua ai fo'i le tele o fa'aletonu phenotypic i nematodes, e aofia ai le pa'u'ū/fa'aitiitia o totoga ma le fa'ateleina o le vacuolization. O nei taunu'uga e fa'ailoa mai ai e ono i ai se sao o vacuoles i le oti o nematode e mafua mai i le methylation. E tāua tele, o le 5-iodoindole e leʻi afaina ai ituaiga laau uma e lua (kapisi ma le radish). O lea la, o lenei suʻesuʻega ua faʻaalia ai o le faʻaaogaina o le iodoindole i lalo o tulaga tau siosiomaga e mafai ona pulea ai le manuʻa o le paina.
O le pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus) e aofia i le pine wood nematodes (PWN), o ni miratory endoparasitic nematodes ua iloa e mafua ai ni faʻaleagaina matuia o le siʻosiʻomaga i vaomatua paina1. O le faʻamaʻi o le pine wilting (PWD) e mafua mai i le pine wood nematode ua avea ma faʻafitauli matuia i le tele o konetineta, e aofia ai Asia ma Europa, ma i Amerika i Matu, e faʻaumatia e le nematode ituaiga paina ua faʻaofiina1,2. O le pa'ū o le paina o se faʻafitauli tele i le tamaoaiga, ma o le ono salalau atu i le lalolagi atoa e popole ai3. O ituaiga paina nei e masani ona osofaʻia e le nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, ma Pinus radiata4. O le pine nematode o se faʻamaʻi matuia e mafai ona fasiotia ai paina i totonu o ni vaiaso poʻo ni masina talu ona faʻamaʻi. E le gata i lea, o le pepesi o le pine nematode e masani ona tupu i le tele o siʻosiʻomaga, o lea ua faʻatuina ai ni filifili o faʻamaʻi tumau1.
O le Bursaphelenchus xylophilus o se nematode parasitic o la'au e iai i le aiga Aphelenchoidea ma le clade 102.5. E 'ai e le nematode ni fungi ma toe fa'atuputupu i totonu o a'ano o la'au paina, ma atia'e i ni vaega e fa o le larva: L1, L2, L3, L4 ma se tagata matua1,6. I lalo o tulaga o le le lava o mea'ai, e ui atu le pine nematode i se vaega fa'apitoa o le larva - dauer, lea e fa'aparasitize ai lana aveta'avale - o le pine bark beetle (Monochamus alternatus) ma fa'aliliuina atu i la'au paina maloloina. I tagata e 'ai maloloina, e vave ona feoa'i nematodes i totonu o a'ano o la'au ma 'ai i sela parenchymatous, lea e o'o atu ai i le tele o tali atu i le maaleale, mago le paina ma le oti i totonu o le tausaga talu ona fa'ama'i1,7,8.
O le puleaina fa'alenatura o nematodes o le paina ua leva ona avea ma lu'itau, fa'atasi ai ma faiga fa'a-karantina na amata mai i le seneturi lona 20. O fuafuaga o lo'o iai nei mo le puleaina o nematodes o le paina e aofia ai togafitiga fa'akemikolo, e aofia ai le fa'asusuina o la'au ma le totoina o nematicides i totonu o ogalaau. O nematicides e masani ona fa'aaogaina o le avermectin ma le avermectin benzoate, e a'afia i le aiga avermectin. O nei vaila'au taugata e matua aoga tele e fa'asaga i le tele o ituaiga nematodes ma e manatu e saogalemu mo le siosiomaga9. Peita'i, o le fa'aaogaina soo o nei nematicides e fa'amoemoeina e fa'atupuina ai le fa'amalosi o le filifiliga lea e toetoe lava a mautinoa e o'o atu ai i le tula'i mai o nematodes o le paina e tete'e, e pei ona fa'aalia mo le tele o iniseti fa'alafua, e pei o le Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella ma nematodes Trichostrongylus colubriformis ma Ostertagia circumcincta, lea ua faasolosolo malie ona atia'e le tete'e i avermectins10,11,12. O le mea lea, e mana'omia ona su'esu'eina pea mamanu tete'e ma su'esu'eina pea nematicides e su'e ai isi auala, taugofie ma fa'alelei mo le siosiomaga e pulea ai le PVD. I tausaga talu ai nei, e toʻatele tusitala ua fautuaina le faʻaaogaina o meaʻai mai laʻau, suāuu taua ma mea manogi e fai ma vailaʻau e pulea ai nematode13,14,15,16.
Talu ai nei na matou faʻaalia ai le gaioiga nematicidal o le indole, o se mole faʻailoilo i le va o sela ma le malo, i le Caenorhabditis elegans 17. O le Indole o se faʻailoilo i totonu o le sela i le microbial ecology, e pulea ai le tele o galuega e aʻafia ai le microbial physiology, spore formation, plasmid stability, drug resistance, biofilm formation, ma le virulence 18, 19. E leʻi suʻesuʻeina le gaioiga o le indole ma ona mea e maua mai i isi pathogenic nematodes. I lenei suʻesuʻega, na matou suʻesuʻeina ai le gaioiga nematicidal o le 34 indoles e faʻasaga i pine nematodes ma faʻamalamalamaina le faiga o le gaioiga o le 5-iodoindole sili ona malosi e faʻaaoga ai le microscopy, time-lapse photography, ma molecular docking experiments, ma iloilo ona aafiaga oona i laʻau e faʻaaoga ai le seed germination assay.
O le maualuga o le malosi (>1.0 mM) o le indole ua lipotia muamua e iai sona aafiaga e fa'amate ai nematodes17. Ina ua mae'a ona togafitia le B. xylophilus (vaega eseese o le olaga) i le indole po'o le 33 indole eseese e maua mai i le 1 mM, o le oti o le B. xylophilus na fuaina e ala i le faitauina o nematodes ola ma nematodes ua oti i vaega pulea ma vaega na togafitia. E lima indole na faaalia ai le malosi tele e fa'amate ai nematodes; o le ola o le vaega pulea e le'i togafitia e 95 ± 7% pe a mavae le 24 itula. Mai indole e 34 na tofotofoina, o le 5-iodoindole ma le 4-fluoroindole i le 1 mM na mafua ai le oti e 100%, ae o le 5,6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, ma le 7-iodoindole na mafua ai le oti e tusa ma le 50% (Table 1).
A'afiaga o le 5-iodoindole i le fausiaina o vacuole ma le metabolism o le nematode o le laau paina. (A) A'afiaga o le avermectin ma le 5-iodoindole i nematode tane matutua, (B) fuamoa o le nematode o le tulaga L1 ma le (C) metabolism o le B. xylophilus, (i) e le'i matauina vacuoles i le 0 itula, o togafitiga na mafua ai le (ii) vacuoles, (iii) faaputuputuga o le tele o vacuoles, (iv) fulafula o vacuoles, (v) tuufaatasia o vacuoles ma le (vi) fausiaina o vacuoles tetele. O aū mumu e faailoa mai ai le fulafula o vacuoles, o aū lanumoana e faailoa mai ai le tuufaatasia o vacuoles ma o aū uliuli e faailoa mai ai vacuoles tetele. Pa fua = 50 μm.
E le gata i lea, o lenei suʻesuʻega na faʻamatalaina ai foʻi le faagasologa faʻasolosolo o le oti e mafua mai i le methane i pine nematodes (Ata 4C). O le oti methanogenic o se ituaiga oti sela e le o le apoptotic e fesoʻotaʻi ma le faʻaputuina o cytoplasmic vacuoles iloga27. O faʻaletonu faʻaletino na matauina i pine nematodes e foliga mai e fesoʻotaʻi vavalalata ma le faiga o le oti e mafua mai i le methane. O suʻesuʻega microscopic i taimi eseese na faʻaalia ai na fausia ni vacuoles tetele ina ua mavae le 20 itula o le faʻaalia i le 5-iodoindole (0.1 mM). Na matauina ni vacuoles microscopic ina ua mavae le 8 itula o togafitiga, ma na faʻateleina lo latou numera ina ua mavae le 12 itula. Na matauina ni vacuoles tetele ina ua mavae le 14 itula. Na manino lava le vacuoles ua fusifusia ina ua mavae le 12–16 itula o togafitiga, e faʻaalia ai o le vacuole fusion o le faʻavae lea o le faiga o le oti methanogenic. Ina ua mavae le 20 itula, na maua ai ni vacuoles tetele i totonu o le anufe. O nei matauga o loʻo faʻatusalia ai le lipoti muamua o le metuosis i le C. elegans.
I anufe na togafitia i le 5-iodoindole, na matauina foʻi le faʻaputuina ma le māvaevae o vacuole (Ata 5), e pei ona faʻamaonia e le piʻo o anufe ma le faʻasaʻolotoina o vacuole i le siosiomaga. Na matauina foʻi le faʻalavelaveina o vacuole i le membrane o le atigi fuamoa, lea e masani ona faʻasaoina lelei e le L2 i le taimi e fofoa ai (Ata Faʻaopoopo S2). O nei matauga e lagolagoina ai le aʻafia o le faʻaputuina o vai ma le faʻaletonu o le osmoregulatory, faʻapea foʻi ma le manuʻa o le sela e mafai ona toe faʻafoʻisia (RCI), i le faagasologa o le fausiaina ma le suppuration o vacuole (Ata 5).
I le mafaufauina o le matafaioi a le iodine i le fausiaina o le vacuole na matauina, na matou suʻesuʻeina le gaioiga nematicidal o le sodium iodide (NaI) ma le potassium iodide (KI). Peitaʻi, i le maualuga (0.1, 0.5 poʻo le 1 mM), e leʻi aʻafia ai le ola o le nematode poʻo le fausiaina o le vacuole (Faʻaopoopoga Ata S5), e ui lava o le 1 mM KI sa i ai se aafiaga nematicidal laʻititi. I le isi itu, o le 7-iodoindole (1 poʻo le 2 mM), e pei o le 5-iodoindole, na mafua ai le tele o vacuoles ma le faʻaleagaina o le fausaga (Faʻaopoopoga Ata S6). O iodoindoles e lua na faʻaalia ai uiga tutusa o le phenotypic i pine nematodes, ae leai NaI ma KI. O le mea e malie ai, o le indole e leʻi mafua ai le fausiaina o le vacuole i le B. xylophilus i le maualuga na tofotofoina (e leʻi faʻaalia faʻamaumauga). O lea la, na faʻamaonia ai e taunuuga o le indole-iodine complex e nafa ma le vacuolization ma le metabolism o le B. xylophilus.
I totonu o indoles na tofotofoina mo le gaioiga nematicidal, o le 5-iodoindole e sili ona maualuga le slip index o le -5.89 kcal/mol, sosoo ai ma le 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), ma le indole (-4.03) (Ata 6). O le malosi o le bond hydrogen bond o le 5-iodoindole i le leucine 218 e faʻamautu ai lona bond, ae o isi indole derivatives uma e bond i le serine 260 e ala i bond hydrogen chain side. Faatasi ai ma isi iodoindoles faʻataʻitaʻiina, o le 2-iodoindole e iai le bond value o le -5.248 kcal/mol, lea e mafua mai i lona bond hydrogen autu ma le leucine 218. O isi bond ua iloa e aofia ai le 3-iodoindole (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/mol), ma le 6-fluoroindole (-2.6 kcal/mol) (Ata Faʻaopoopo S8). O le tele o indoles halogenated ma le indole lava ia, vagana ai le 5-iodoindole ma le 2-iodoindole, e fausia ai se fusi ma le serine 260. O le mea moni e faapea o le fusifusia o le hydrogen ma le leucine 218 o se faailoga lea o le fusifusia lelei o le receptor-ligand, e pei ona matauina mo le ivermectin (Supplementary Fig. S7), e faamaonia ai o le 5-iodoindole ma le 2-iodoindole, e pei o le ivermectin, e fusifusia mau i le nofoaga galue o le GluCL receptor e ala i le leucine 218 (Ata 6 ma le Supplementary Fig. S8). Matou te fautuaina o lenei fusifusia e manaomia e faatumauina ai le fausaga o le pu tatala o le GluCL complex ma o le fusifusia mau i le nofoaga galue o le GluCL receptor, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin ma le ivermectin e faatumauina ai le avanoa o le ion channel ma faatagaina ai le mitiia o le vai.
O le fa'apipi'iina o le indole ma le indole halogenated i le GluCL. O fa'atulagaga o le fusifusia o le (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, ma le (D) 5-iodoindole ligands i le nofoaga galue o le GluCL. O le porotini o lo'o fa'atusalia e se lipine, ma o fusiua o le ivi tua o le hydrogen o lo'o fa'aalia o ni laina togitogi samasama. (A′), (B′), (C′), ma le (D′) o lo'o fa'aalia ai fegalegaleaiga o ligands talafeagai ma toega o amino acid o lo'o siomia ai, ma o fusiua o le hydrogen i autafa o lo'o fa'ailoa mai e ni aū togitogi piniki.
Sa faia ni faʻataʻitaʻiga e iloilo ai le aafiaga oona o le 5-iodoindole i le tuputupu aʻe o fatu kāpeti ma le laʻau radish. O le 5-iodoindole (0.05 poʻo le 0.1 mM) poʻo le avermectin (10 μg/mL) e itiiti pe leai foʻi se aafiaga i le tuputupu aʻe muamua ma le tulaʻi mai o laʻau laiti (Ata 7). E le gata i lea, e leai se eseesega taua na maua i le va o le fua faatatau o le tuputupu aʻe o fatu e leʻi togafitia ma fatu na togafitia i le 5-iodoindole poʻo le avermectin. O le aafiaga i le faʻalauteleina o le aʻa ma le aofaʻi o aʻa faʻalava na fausia e le taua tele, e ui lava o le 1 mM (10 taimi o lona malosi malosi) o le 5-iodoindole na faʻatuai teisi ai le atinaʻeina o aʻa faʻalava. O nei taunuuga e faʻaalia ai o le 5-iodoindole e le oona i sela o laʻau ma e le faʻalavelave i faiga o le tuputupu aʻe o laʻau i le malosi na suʻesuʻeina.
A'afiaga o le 5-iodoindole i le tuputupu a'e o fatu. Fa'atupuina, tuputupu a'e ma le a'a i autafa o fatu o le B. oleracea ma le R. raphanistrum i luga o le Murashige ma le Skoog agar medium ma le avermectin po'o le 5-iodoindole pe leai fo'i. Na fa'amaumauina le tuputupu a'e pe a mavae aso e 3 o le fa'asusuina i le 22°C.
O lenei suʻesuʻega o loʻo lipotia mai ai ni mataupu se tele o le fasiotia o nematode e indoles. O le mea e taua, o le lipoti muamua lea o le iodoindole e mafua ai le methylation (o se faiga e mafua mai i le faaputuputuina o vacuoles laiti e faasolosolo malie ona tuufaatasia i ni vacuoles tetele, ma iu ai ina oʻo atu ai i le malepe o le membrane ma le oti) i nila paina, faatasi ai ma le iodoindole o loʻo faaalia ai ni meatotino taua o le nematicidal e tutusa ma le nematicide avermectin faapisinisi.
Ua lipotia muamua mai o Indoles e faʻatino le tele o galuega faʻailoilo i prokaryotes ma eukaryotes, e aofia ai le taofia/faʻavaeina o biofilm, ola o siama, ma le pathogenicity19,32,33,34. Talu ai nei, o aafiaga faʻamalolo e ono maua mai i indoles halogenated, indole alkaloids, ma semisynthetic indole derivatives ua tosina mai ai le tele o suʻesuʻega35,36,37. Mo se faʻataʻitaʻiga, ua faʻaalia e indoles halogenated e fasiotia ai sela tumau o Escherichia coli ma Staphylococcus aureus37. E le gata i lea, o se mea taua faasaienisi le suʻesuʻeina o le aoga o indoles halogenated e faasaga i isi ituaiga, genera, ma malo, ma o lenei suʻesuʻega o se laasaga agai i le ausiaina o lenei sini.
O iinei, matou te fautuaina se faiga mo le 5-iodoindole-induced lethality i le C. elegans e faʻavae i luga o le reversible cell injury (RCI) ma le methylation (Ata 4C ma le 5). O suiga o le edematous e pei o le fulafula ma le vacuolar degeneration o faʻailoga ia o le RCI ma le methylation, e faʻaalia o ni vacuoles tetele i le cytoplasm48,49. E faʻalavelave le RCI i le gaosiga o le malosi e ala i le faʻaitiitia o le gaosiga o le ATP, mafua ai le le manuia o le pamu ATPase, pe faʻalavelaveina membrane o le sela ma mafua ai le vave tafe mai o le Na+, Ca2+, ma le vai50,51,52. E tulaʻi mai vacuoles intracytoplasmic i sela o manu ona o le faʻaputuina o le vai i le cytoplasm ona o le tafe mai o le Ca2+ ma le vai53. O le mea e malie ai, o lenei faiga o le faʻaleagaina o le sela e mafai ona toe faʻafoʻisia pe afai e le tumau le faʻaleagaina ma amata ona gaosia e sela le ATP mo se vaitaimi patino, ae afai e faʻaauau pea le faʻaleagaina pe faʻateteleina, e oti sela.54 O a matou matauga e faʻaalia ai o nematodes e togafitia i le 5-iodoindole e le mafai ona toe faʻafoʻisia le biosynthesis masani pe a uma ona aʻafia i tulaga faigata.
O le phenotype methylation na mafua mai i le 5-iodoindole i le B. xylophilus atonu e mafua mai i le i ai o le iodine ma lona tufatufaina atu o le molecular, talu ai o le 7-iodoindole e itiiti sona aafiaga fa'alavelave i le B. xylophilus nai lo le 5-iodoindole (Table 1 ma le Supplementary Figure S6). O nei taunuuga e ogatasi ma su'esu'ega a Maltese et al. (2014), o ē na lipotia mai o le translocation o le pyridyl nitrogen moiety i le indole mai le para- i le meta-position na fa'aumatia ai le vacuolization, growth inhibition, ma le cytotoxicity i sela U251, ma fa'ailoa mai ai o le fegalegaleaiga o le mole ma se nofoaga fa'apitoa e galue i le porotini e taua tele27,44,45. O fegalegaleaiga i le va o indole po'o halogenated indoles ma GluCL receptors na matauina i lenei su'esu'ega e lagolagoina ai fo'i lenei manatu, aua o le 5- ma le 2-iodoindole na maua e fusifusia malosi i GluCL receptors nai lo isi indoles na su'esu'eina (Ata 6 ma le Supplementary Figure S8). O le iodine i le tulaga lona lua po'o le lima o le indole na maua e fusifusia i le leucine 218 o le GluCL receptor e ala i le backbones hydrogen bond, ae o isi indole halogenated ma le indole lava ia e fausia ai ni fusifusia hydrogen side-chain vaivai ma le serine 260 (Ata 6). O le mea lea matou te mateina ai o le nofoaga o le halogen e taua tele i le fa'aosofiaina o le vacuolar degeneration, ae o le fusifusia malosi o le 5-iodoindole e taofia ai le ion channel e tatala, ma fa'ataga ai le vave tafe mai o le vai ma le vacuole breath. Peita'i, o le faiga auiliili o le gaioiga o le 5-iodoindole e le'i fa'amautuina.
A'o le'i fa'atinoina le fa'aaogaina o le 5-iodoindole, e tatau ona iloiloina lona a'afiaga oona i la'au. O a matou fa'ata'ita'iga o le totoina o fatu na fa'aalia ai e leai se a'afiaga leaga o le 5-iodoindole i le totoina o fatu po'o fa'agasologa o le atina'eina mulimuli ane i le tele o vaila'au na su'esu'eina (Ata 7). O lea la, o lenei su'esu'ega ua maua ai se fa'avae mo le fa'aaogaina o le 5-iodoindole i le siosiomaga fa'ale-siosiomaga e pulea ai le a'afiaga leaga o nematodes o le paina i la'au paina.
Ua faʻaalia i lipoti ua mavae o le togafitiga e faʻavae i luga o le indole o se auala e mafai ona foia ai le faʻafitauli o le teteʻe atu i vailaʻau faʻamaʻi ma le alualu i luma o le kanesa55. E le gata i lea, o indole e iai a latou gaioiga e teteʻe ai i siama, faʻaitiitia ai le kanesa, faʻamalosia ai le puipuiga o le tino, faʻaitiitia ai le mumū, faʻaitiitia ai le suka, faʻaitiitia ai le siama, faʻaitiitia ai le tuputupu aʻe o siama ma faʻaitiitia ai le kanesa ma e ono avea o se faʻavae lelei mo le atinaʻeina o vailaʻau56,57. O lenei suʻesuʻega o loʻo fautua mai ai mo le taimi muamua le ono faʻaaogaina o le iodine o se vailaʻau e teteʻe ai i siama ma vailaʻau e teteʻe ai i siama.
Na maua le Avermectin i le tolusefulu tausaga talu ai ma manumalo ai i le Nobel Prize i le 2015, ma o lona faʻaaogaina o se vailaʻau e teteʻe ai i siama o loʻo faʻaauau pea. Peitaʻi, ona o le vave o le atinaʻeina o le teteʻe atu i avermectins i nematodes ma iniseti faʻamaʻi, e manaʻomia se isi fuafuaga, taugofie, ma e le afaina ai le siosiomaga e pulea ai le faʻamaʻi PWN i laʻau paina. O lenei suʻesuʻega o loʻo lipotia mai ai foʻi le auala e fasiotia ai e le 5-iodoindole nematodes o le paina ma e maualalo le oona o le 5-iodoindole i sela o laʻau, lea e tatala ai avanoa lelei mo lona faʻaaogaina faapisinisi i le lumanaʻi.
O faʻataʻitaʻiga uma na faʻamaonia e le Komiti o Amioga Mama a le Iunivesite o Yeungnam, Gyeongsan, Korea, ma o metotia na faʻatinoina e tusa ai ma taʻiala a le Komiti o Amioga Mama a le Iunivesite o Yeungnam.
Sa faia fa'ata'ita'iga o le fa'asusuina o fuāmoa e fa'aaoga ai faiga fa'atulagaina43. Mo le iloiloina o le fua faatatau o le fofoa (HR), o nematodes matutua e 1-aso le matutua (pe tusa ma le 100 fafine ma le 100 tane) sa fa'aliliuina i ipu Petri o lo'o i ai le siama ma tu'u e ola mo le 24 itula. Ona vavae'ese lea o fuāmoa ma togafitia i le 5-iodoindole (0.05 mM ma le 0.1 mM) po'o le avermectin (10 μg/ml) e fai ma fa'asusu i le vai mama. O nei fa'asusu (500 μl; pe tusa ma le 100 fuāmoa) sa fa'aliliuina i totonu o se ipu fa'ato'aga aano e 24-vai ma fa'asusu i le 22 °C. Sa faia le faitauga o le L2 pe a uma le 24 itula o le fa'asusuina ae sa manatu ua oti pe afai e le minoi sela pe a fa'aosofia i se uaea platinum lelei. Sa faia lenei fa'ata'ita'iga i ni vaega se lua, e ta'itasi ma le ono toe fai. O fa'amaumauga mai fa'ata'ita'iga uma e lua sa tu'ufa'atasia ma tu'uina atu. O le pasene o le HR e fa'atatauina e pei ona taua i lalo:
Sa iloiloina le oti o anufe e faʻaaoga ai auala ua uma ona atiaʻe. Sa aoina fuāmoa o nematode ma faʻafetaui embryos e ala i le fofoa i totonu o le vai mama e faʻatupu ai anufe o le vaega L2. O anufe ua faʻafetaui (pe tusa ma le 500 nematodes) sa togafitia i le 5-iodoindole (0.05 mM ma le 0.1 mM) poʻo le avermectin (10 μg/ml) ma faʻatupuina i luga o le B. cinerea Petri plates. A maeʻa le 48 itula o le faʻasusuina i le 22 °C, sa aoina nematodes i totonu o le vai mama ma suʻesuʻeina mo le i ai o vaega L2, L3, ma le L4. O le i ai o vaega L3 ma le L4 na faʻaalia ai le suiga o anufe, ae o le i ai o le vaega L2 na faʻaalia ai le leai o se suiga. Sa maua ata e faʻaaoga ai le iRiS™ Digital Cell Imaging System. Sa faia lenei faʻataʻitaʻiga i ni vaega se lua, e taʻitasi ma le ono toe fai. Sa tuʻufaʻatasia faʻamatalaga mai faʻataʻitaʻiga uma e lua ma tuʻuina atu.
O le oona o le 5-iodoindole ma le avermectin i fatu na iloiloina e ala i le faʻaaogaina o suega germination i luga o le Murashige ma le Skoog agar plates.62 O fatu o le B. oleracea ma le R. raphanistrum na muamua faʻasusu i le vai mama mo le aso e tasi, fufuluina i le 1 ml 100% ethanol, faʻamamāina i le 1 ml 50% bleach faʻapisinisi (3% sodium hypochlorite) mo le 15 minute, ma fufuluina faalima i le 1 ml vai mama. Ona oomi lea o fatu ua faʻamamāina i luga o le germination agar plates o loʻo i ai le 0.86 g/l (0.2X) Murashige ma le Skoog medium ma le 0.7% bacteriological agar ma le 5-iodoindole poʻo le avermectin pe leai foi. Ona faʻamamāina lea o plates i le 22 °C, ma puʻeina ata ina ua mavae aso e 3 o le faʻamamāina. O lenei faʻataʻitaʻiga na faia i ni vaega se lua, e taʻitasi ma le ono toe faia.
Taimi na lafoina ai: Fepuari-26-2025